今天是2020年8月17日 星期一,歡迎光臨本站 上海唯地生物技術有限公司 網址: www.1523417.buzz

新品推薦

JM109(DE3)

文字:[大][中][小] 2017-10-19    瀏覽次數:2090    

JM109(DE3) Chemically Competent Cell 產品說明書




產品規格 (CAT#: EC1070)

JM109(DE3):                                             100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質期):                             -80℃(6個月) 


基因型

endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+) relA1 supE44 D (lac-proAB) [F? traD36 proAB laqI qM15](DE3)


產品說明

JM109(DE3)菌株來源于JM109,用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶,該區整合于JM109的染色體上,所以稱為JM109(DE3)。可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等質粒的蛋白表達。JM109(DE3)菌株不可用于藍白斑篩選試驗。唯地生物生產的JM109(DE3)感受態細胞由特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率高于108 cfu /μg DNA。


操作方法

1. JM109(DE3) 感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手撥打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或

    LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。


● Sample Induction Protocol (for reference only)


1. Inoculate a single colony from a freshly streaked plate into 3ml of LB medium containing the appropriate antibiotic for the plasmid and host strain.

2. Incubate with shaking at 200 rpm at 37℃ overnight. 

3. Inoculate 50 ml of LB medium containing the appropriate antibiotic with 0.5 ml of the overnight culture prepared in step 2(use the 500 ml triangular flask as the container would be better).

4. Incubate with shaking at 150 rpm at 37℃ until the OD 600 reaches 0.5-0.8. (0.6 recommended; about 2.5h).

5. (Optional)Pipet 1ml of  the cultures into clean microcentrifuge tubes and  place the tubes on ice until  needed  for gel analysis or storage at  -20℃. These will serve as the non-induced control samples.     

6. Add IPTG to a final concentration of 1 mM. Optimal time for induction of the target protein may vary from 2-16 hours, depending on the protein.

7. Incubate with shaking at 120 rpm at 37℃ for 2-4 hours. To determine the optimal time for induction of the target protein, it is recommended that a time course experiment be performed varying the induction from 2-16 hours.

8. Place the culture on ice for 10 minutes. Harvest cells by centrifugation at 5,000×g for 10 minutes at 4℃.

9. Remove the supernatant and store the cell pellet at -20℃ (storage at lower temperatures is also acceptable). 


IPTG配制:

1 M(mol/L)IPTG(分 子 式: C9H18O5S,分 子 量: 238.30)溶液:稱取 2.38 g  IPTG固體,加入8ml ddH2O溶解

補足水到10 ml用0.22um 濾膜過濾除菌,分裝即可。


注意事項

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

3. 誘導時,IPTG濃度可選(0.1-2 mM均可)。

4. 為獲得需要量的蛋白,最佳誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優化。





說明書下載

JM109(DE3) Chemically Competent Cell 產品說明書
返回上一步
打印此頁
[向上]
在線客服

銷售QQ

技術QQ

咨詢電話:
021-34790199

請掃描二維碼
打開手機站

四川快乐12历史开奖查询